Hamzah, Salih: Reinigung und Charakterisierung von 6-PGD aus Wachtelleber

In dieser Studie wurde das Enzym 6-Phosphogluconat-Dehydrogenase (6PGD) aus der Wachtelleber durch Ammoniumsulfat-Fällung und 2',5'-ADP-Sepharose 4B-Affinitätschromatographie gereinigt. Die spezifische Aktivität betrug 14,6 EU/mg, die Ausbeute 89 % und die Reinigung 112-fach. Die Enzymaktivität wurde spektrophotometrisch bei 340 nm gemessen. Durch SDS-PAGE wurde die Reinheit des Enzyms überprüft. Das Molekulargewicht des gereinigten Enzyms wurde mit der SDS-PAGE-Methode auf 44 KDa berechnet. Die Proteinbestimmung erfolgte nach der Bradford-Methode. Für das Enzym wurden der optimale pH-Wert (8,0), der stabile pH-Wert (8,0), die optimale Ionenstärke (600 mM in Tris-HCl) und die optimale Temperatur (60°C) bestimmt. Darüber hinaus wurden die KM- und Vmax-Werte für 6-Phosphogluconat (6-PGA) und NADP+ mit 0,058 und 0,0015 mM bzw. 0,0078 und 0,057 EU/ml berechnet.